O trabalho teve como objetivo identificar genes envolvidos na resistência do cafeeiro contra Hemileia vastatrix, por meio da técnica de Hibridização Subtrativa por Supressão. Para isso, folhas do genótipo Híbrido de Timor CIFC 832/2 foram inoculadas com a raça II do fungo. Esse cafeeiro foi escolhido por ser resistente a todas as raças do patógeno identificadas até o momento. Nos períodos de 12 e 24 horas após a inoculação, os RNAs de folhas inoculadas e não inoculadas foram coletados e os cDNAs sintetizados. A subtração dos cDNAs resultou em quatro bibliotecas contendo 528 clones. Esses clones correspondem a potenciais genes diferencialmente expressos em respostas à infecção do cafeeiro a H. vastatrix. As subtrações foram realizadas em ambas as direções, de forma a possibilitar a identificação de genes induzidos e reprimidos na interação incompatível. A análise da seqüência de 31 clones diferencialmente expressos indicou que muitos destes codificam proteínas envolvidas com a resposta de defesa de hospedeiro a fitopatógenos, como por exemplo, quitinases, proteases serina e endoxyloglucano transferase. A caracterização futura de outros clones das bibliotecas, bem como a comprovação do envolvimento dos genes por outras técnicas de genômica funcional contribuirão para o esclarecimento do mecanismo molecular envolvidos na defesa do cafeeiro a H. vastatrix, visando dar subsídios à obtenção de variedades com resistência duradoura.
This work aims to identify coffee genes involved in resistance against the phytopathogen Hemileia vastatrix using suppression subtractive hybridization (SSH) technique. For this proposal, leaves of Híbrido de Timor CIFC 832/2 were inoculated with race II of the fungi. This genotype was chosen due to its resistance to all the known races of the pathogen. After 12 and 24 hours pos inoculation, the RNA of inoculated and non-inoculated leaves was collected and the cDNAs were synthesized. The cDNA subtraction resulted in four library containing 528 clones. These clones correspond to the potential differentially expressed genes in response to the H. vastatrix infection in coffee. The subtractions were performed in both directions to enable the identification of genes induced and repressed during the incompatible interaction. The analysis of 31 differentially expressed clones indicated that some of them codify proteins involved in host defense response to phytopathogens, for instance, chitanases, serine proteases, endoxyloglucan transferase. Further characterization of the remain clones of the library and validation of the involvement of these genes by other functional genomics techniques will contribute to the understanding of the molecular mechanism involved in coffee defense to H. vastatrix.
