Conservação de germoplasma de espécies de Coffea utilizando a criopreservação em nitrogênio líquido

Abstract

A conservação a longo prazo de germoplasma de espécies de Coffea ainda não é possivel, devido ao comportamento intermediário das sementes no armazenamento. Atualmente, o germoplasma dessas espécies é conservado em coleções a campo, entretanto, esta não é uma alternativa para a conservação a longo prazo e o material encontra-se sob risco de destruição devido a desastres climáticos ou biológicos. Assim, o desenvolvimento de técnicas alternativas de conservação a longo prazo dos recursos genéticos de Coffea spp. vem a ser uma importante prioridade. A biotecnologia criou novas possibilidades para a conservação de recursos genéticos de plantas usando a conservação in vitro sob condições de crescimento lento ou criopreservação. A criopreservação é a mais promissora para a conservação a longo prazo de células, tecidos e órgãos vegetais, a partir dos quais plantas inteiras podem ser regeneradas. Assim, este trabalho foi desenvolvido com o objetivo estabeler protocolos de criopreservação do germoplasma de Coffea, como uma alternativa à conservação no campo. A criopreservação envolve a desidratação parcial do material e a imersão em nitrogênio líquido (N 2 L). Os eixos embrionários isolados são com frequëncia tolerantes ao dessecamento e armazenamento a baixas temperaturas que seriam letais para as sementes inteiras. Essa tolerância apresentada por eixos embrionários sugere que o seu teor de umidade pode ser ajustado experimentalmente para valores que permitam a sua criopreservação em nitrogênio líquido. Com base nessa hipótese, eixos embrionários de espécies de Coffea arabica cv Catuai Vermelho IAC99 foram isolados de sementes contendo diferentes teores de umidade e congelados em nitrogênio líquido. O protocolo desenvolvido para esta cultivar foi testado para a criopreservação de outras nove cultivares de C arabica, oito de Coffea canephora e de Coffea racemosa. De modo geral, a viabilidade dos eixos de Coffea isolados de sementes que não foram congelados em nitrogênio líquido foi de 90-100%, dependendo do seu teor de umidade inicial. A viabilidade de eixos isolados de sementes congeladas em nitrogênio líquido também foi determinada pelo seu teor de umidade inicial. Um total de 85-100% dos eixos permaneceram viáveis após a criopreservação em nitrogênio líquido. Os resultados obtidos indicam que a criopreservação de eixos embrionários de espécies do gênero Coffea é uma alternativa viável para a conservação de germoplasma desta importante cultura. O protocolo utilizado neste estudo é simples, não requer uso de crioprotetores químicos, congeladores programáveis e propicia alta porcentagem de sobrevivência.